Latar Belakang: Sistem adhesive two step pada bonding generasi ke-6 memiliki monomer asam yang terbukti signifikan menghambat pertumbuhan bakteri. Monomer 12-Methacryloyloxydodecyl pyridinium bromide (MDPB) memiliki kekuatan ikatan yang stabil untuk dentin koronal dengan aktivitas antibakteri yang lebih baik dibandingkan dengan bonding lainnya. Salah satu metode pencegahan karies sekunder dengan resin komposit bioaktif yang memiliki sifat antibakteri yaitu dengan penambahan senyawa ammonium kuartener berbasis resin monomer dalam matriks yang berfungsi sebagai agen penghambat kontak bakteri pada material restorasi. Amonium kuarter yang bermuatan negatif akan mengikat membran sel bakteri yang bermuatan positif, sehingga terjadi tekanan yang menyebabkan kematian bakteri dan mencegah terjadinya karies sekunder. Tujuan: Mengetahui dan menganalisis pengaruh aplikasi bonding dengan kandungan antibakteri terhadap jumlah bakteri Lactobacillus acidophilus yang melekat pada material restorasi resin komposit bioaktif. Metode: Desain penelitian ini menggunkan penelitian eksperimental murni (true experimental) dengan rancangan post test only with control group design  menggunakan 39 gigi premolar 1 dibagi menjadi 3 kelompok: kelompok perlakuan yang diberi bonding dan kelompok kontrol yang tidak menggunakan bonding.Hasil: Hasil uji statistik One Way Anova menunjukkan perbedaan bermakna (p = 0,000). Hasil uji Post hoc bonferoni  menunjukkan perbedaan bermakna (p = 0,000) antara kelompok perlakuan dan kelompok kontrol. Kesimpulan: Terdapat perbedaan jumlah melekatan nya bakteri Lactobacillus acidophilus pada material restorasi dengan penggunaan bonding dengan antibakteri, bonding non-antibakteri, dan tanpa bonding.