Latar Belakang: Resin komposit merupakan salah satu bahan restorasi yangmempunyai estetik baik warna seperti gigi asli dan memiliki sifat tidak mudah larut. Sifat fisik resin komposit yang sangat penting yakni kekerasan. Faktor yang mempengaruhi kekerasan permukaan resin komposit yaitu makanan dan minuman.Salah satu minuman yang umum dikonsumsi oleh masyarakat yaitu minuman prebiotik seperti susu fermentasi. Susu fermentasi memiliki kandungan asam laktat dengan pH sekitar 4,2-4,8,dan durasi paparan dapat mempengaruhi matriks organik dari resin komposit. Tujuan: Untuk menganalisis pengaruh lama perendaman minuman prebiotik terhadap kekerasan permukaan resin komposit nanofiller. Metode: Jenis penelitian ini menggunakan metode true experimental dengan post-test only with control group design dan uji statistik one way ANOVA dilanjutkan dengan Post Hoc Bonfferoni. Pembuatan sampel sebanyak 24 sampel, dikelompokkan menjadi 6 kelompok, 3 kelompok direndam minuman prebiotik dan 3 kelompok dalam akuades steril sebagai kelompok kontrol dengan masing-masing perendaman 30 menit, 60 menit, dan 120 menit. Hasil: Uji statistik One Way ANOVA nilai p=0,031 (p<0,05) yang berarti terdapat perbedaan bermakna. Pada uji Post Hoc Bonferroni menunjukkan terdapat perbedaan bermakna (p<0,05) antara kelompok resin komposit nanofiller yang direndam dalam minuman prebiotik selama 120 menit. Pada kelompok resin komposit nanofiller yang direndam minuman akuades selama 30 menit nilai rata-rata (52,40 ± 0,77), sedangkan kekerasan permukaan terkecil terdapat pada kelompok resin komposit nanofiller yang direndam dalam minuman prebiotik selama 120 menit dengan rata-rata nilai (48,7 ± 2,16). Kesimpulan: Terdapat perubahan kekerasan permukaan resin komposit nanofiller setelah dilakukan perendaman dalam minuman prebiotik selama 120 menit.