Penggunaan antibiotik yang tidak tepat masih banyak ditemukan di masyarakat. Hal ini dapat menyebabkan terjadinya resiko buruk seperti resistensi antibiotik. Resistensi terhadap antibiotik ini sangat berkaitan dengan kesalah pahaman terhadap penggunaan antibiotik oleh masyarakat. Tujuan dilakukan penelitian ini untuk mengetahui tingkat pengetahuan masyarakat tentang penggunaan antibiotik di Kota Banjarmasin. Penelitian ini termasuk non eksperimental (observasional), teknik pengambilan sampel menggunakan metode purposive sampling. Populasi penelitian adalah masyarakat Kota Banjarmasin. Subjek penelitian bejumlah 384 orang. Hasil yang didapat yakni mayoritas responden didominasi berjenis kelamin perempuan (70,84%) berusia 17-40 tahun (89,84%), berpendidikan sarjana (45,05%) dan responden masih pelajar/mahasiswa (43,22%).  Secara umum hasil penelitian menunjukkan masyarakat Kota Banjarmasin memiliki pengetahuan tentang penggunaan antibiotik dengan kategori tinggi sebanyak 47%, kategori sedang sebanyak 53%, dan kategori rendah sebanyak 0%.