Radikal bebas adalah molekul elektron yang tidak berpasangan sehingga bersifat tidak stabil dan dapat menyerang makromolekul penting menyebabkan kerusakan sel pada tubuh. Antioksidan sendiri adalah senyawa yang dapat mencegah reaksi oksidatif oleh radikal bebas. Salah satu tumbuhan yang berpotensi sebagai antioksidan adalah paku sepat. Penelitian ini bertujuan mengetahui aktivitas antioksidan dan penetapan kadar flavonoid total ekstrak batang-daun paku sepat. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode DPPH yang digunakan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dan Kolorimetri dengan menggunakan pereaksi AlCl₃ yang digunakan untuk mengetahui kadar flavonoid total. Aktivitas antioksidan ekstrak etnaol Paku Sepat didapatkan dengan nilai IC₅₀ 148,7116 ± 2,061533 dengan kategori antioksidan sedang. Kandungan flavonoid total yang diperoleh dari ekstrak paku sepat Setara dengan 3,425% b/b ekuivalen kuersetin