Pembelajaran sub konsep Hewan Vertebrata melibatkan ciri karakteristik vertebrata pada setiap kelasnya dan memerlukan bahan pembelajaran untuk mengatasi kesulitan peserta didik. Handout digital merupakan salah satu bahan ajar yang dibuat untuk dapat mempermudah penyampaian materi pada saat proses pembelajaran yang memuat materi bahan ajar, soal-soal, dan petunjuk praktikum mandiri yang dapat digunakan untuk pembelajaran secara daring maupun luring. Penelitian ini bertujuan untuk menguji pengaruh penggunaan handout digital terhadap hasil belajar dan sikap ilmiah peserta didik pada sub konsep Hewan Vertebrata, serta menguraikan respon peserta didik terhadap penggunaan handout digital. Jenis penelitian ini menggunakan metode Quasi Experimen (eksperimen semu).  Sampel penelitian ini adalah peserta didik kelas X SMAN 4 Banjarmasin yang dibagi menjadi satu kelas perlakuan dan satu kelas kontrol. Data hasil belajar dan sikap ilmiah diuji menggunakan Uji Wilcoxon Signed Ranks Test dengan menggunakan program SPSS 21. Dari hasil penelitian yang diperoleh yaitu hasil belajar peserta didik menunjukkan bahwa penggunaan handout digital berpengaruh terhadap hasil belajar dengan nilai Asymp. Sig. (2-tailed) sebesar 0.000<0,05. Disisi lain, data hasil penelitian ini juga menunjukkan bahwa penggunaan handout digital berpengaruh terhadap sikap ilmiah dengan nilai Asymp. Sig. (2-tailed) sebesar 0,000<0,05. Selain itu, respon peserta didik terhadap penggunaan handout digital mendapatkan respon yang positif dalam pembelajaran di kelas dengan rata-rata 78,97%  yang termasuk kategori setuju.

Kata kunci: Handout Digital, Hasil Belajar, Hewan Vertebrata, Sikap Ilmiah.