Rizosfer merupakan daerah di sekitar perakaran tanaman yang menjadi dasar ideal bagi hidupnya mikroba tanah. Pengembangan penelitian ini bertujuan untuk mengetahui keberagaman koloni jamur mikroskopis pada tanah serta untuk mengetahui kesesuaian, kelayakan, keterbacaan dan respon mahasiswa terhadap Booklet keragaman koloni jamur mikroskopis rizosfer pohon kelapa sawit yang dikembangkan. Hasil keragaman koloni jamur yang didapatkan diidentifikasi berdasarkan literatur sifat-sifat koloni dan dikembangkan menjadi bahan ajar berbentuk Booklet sebagai bahan penunjang mata kuliah Mikrobiologi. Pengembangan Booklet dilakukan dengan model 4-D oleh Thiagarajan sampai pada tahap desiminasi terbatas. Penelitian pengembangan dilakukan dengan pendekatan deskriptif dengan pengambilan sampel tanah pada tiga titik yang kemudian di biakkan pada medium. Subjek pada uji kesesuaian dan uji kelayakan dilakukan oleh 3 orang validator, uji keterbacaan dilakukan oleh 6 mahasiswa dan uji respon mahasiswa dilakukan oleh 9 mahasiswa Program Studi Pendidikan Biologi PMIPA FKIP ULM Banjarmasin yang telah lulus mata kuliah Mikrobiologi. Berdasarkan hasil penelitian ditemukan 13 jenis koloni jamur mikroskopis yang tumbuh pada medium Potato Dextrose Agar dengan hasil identifikasi dari morfologi masing-masing koloni yang terlihat. Booklet yang dikembangkan memperoleh persentase 90,2% pada uji kesesuaian dengan kriteria sangat sesuai, 85,2% pada uji kelayakan dengan kriteria sangat layak, 87% pada uji keterbacaan dengan kriteria sangat baik dan 88% pada uji respon mahasiswa dengan kriteria sangat positif.