Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui lama inkubasi yang optimum menggunakan kombinasi enzim mannannase dan selulase untuk mendapatkan kandungan fraksi serat BIS yang terbaik. Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap dengan 4 perlakuan dan 6 ulangan sehingga berjumlah 24 satuan percobaan. Perlakuan pada penelitian ini adalah tingkat lama inkubasi BIS, yaitu 24 jam, 48 jam, 72 jam, dan kontrol (tanpa inkubasi). Hasil penelitian menunjukkan bahwa lama inkubasi bungkil inti sawit menggunakan enzim mannanase dan selulase berpengaruh nyata (P<0.05) dapat menurunkan fraksi NDF, ADF dan Hemiselulosa. Lama inkubasi yang optimal untuk mendapatkan fraksi serat yang paling baik adalah inkubasi selama 24 jam.