Escherichia coli merupakan salah satu bakteri penghasil biofilm. Bahan disinfeksi yang umum digunakan adalah hipoklorit atau khlorin. Namun, penggunaan disinfektan setiap hari dirumah sakit perlu dievaluasi terutama pada bakteri pembentuk biofilm. Bahan disinfeksi dari kombinasi ekstrak Eichornia crassipes dan Pistia stratiotes mengandung berbagai senyawa antibiofilm yang berpontensi sebagai disinfektan alami. Sehingga tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui daya hambat kombinasi ekstrak E.crassipes dan P.stratiotes dalam menghambat pembentukan biofilm E.coli Tinjauan Mean Gray Value dan Minimum Biofilm Inhibitory Concentration. Rancangan penelitian ini adalah true experimental posttest only control group design. Perlakuan didalam penelitian ini sebanyak 4 kali pengulangan meliputi ekstrak kombinasi E.crassipes dan P.stratiotes pada konsentrasi 6,25%, 12,5%, 25%, 50%, 75%, dan 100%, serta khlorin 0,0002%, DMSO 1% dan TSB + Glucose 10%. Analisis data daya hambat kombinasi ekstrak E.crassipes dan P.stratiotes sebagai efek antibiofilm pada E.coli ATCC 25922 menggunakan uji One-way Anova dan Post Hoc Duncan. Hasil penelitian ini memperlihatkan rata-rata MGV yang dihasilkan pada konsentrasi 100% lebih tinggi dari pada konsentrasi 75% yang hasilnya tidak berbeda bermakna dengan Khlorin 0,0002%. Kesimpulan penelitian ini, kombinasi ekstrak E.crassipes dan P.stratiotes menghasilkan daya hambat terhadap pembentukan biofilm dari E.coli.