Fragmen coI mtDNA, suatu gen yang krusial sebagai penyandi protein CoI, subunit enzim sitokro c oksidase yang memproduksi ion hidrogen dan memutar subunit-subunit enzim ATP sintase, suatu enzim yang berfungsi memproduksi ATP. Tujuan penelitian ini yaitu mengetahui jarak genetik fragmen coI mtDNA dan pusat sebaran ayam (Gallus Gallus Gallus, Gallus Gallus Bankiva, Gallus Gallus Spadiceus, Gallus Gallus Jabouillei, Gallus Gallus Murghi, dan Gallus Gallus Domesticus). Penelitian ini dilakukan dengan metode Nei dan ANN menggunakan aplikasi Microsoft Excel, MEGA, MATLAB versi 2020 dan situs MAFFT. Penelitian menunjukkan bahwa perhitungan jarak individu tertinggi adalah 7 pada perbandingan kode akses GU261716.1 (Myanmar) dengan GU261680.1 (India) sedangkan perhitungan jarak inidividu terendah adalah 0 pada perbandingan kode akses AP003319.1 (Laos) dengan GU261709.1 (India). Hasil perhitungan jarak populasi tertinggi adalah 1,5619 pada negara Myanmar-Indonesia dan nilai terendah adalah 0 pada populasi Easter Islands-Hawaii, Easter Islands-Niue, dan Hawaii-Niue. Perbandingan laju mutasi umur fosil terhadap jarak genetika populasi, laju mutasi mtDNA ayam berkisar 1.900 – 920 tahun/mutasi. Perbandingan struktur asam amino (ARN58106.1) terhadap masing-masing kelompok menunjukkan perbedaan mutasi pada urutan (A30T), (A121T), (M470T). Mutasi basa nitrogen ini terarah meskipun menyebabkan perubahan polaritas asam amino.

Keywords: Fragmen coI mtDNA, COI, Gallus Gallus Domesticus.