Kalimantan Selatan memiliki banyak buah tropis salah satunya adalah durian(Durio zibethinus Murr.). Saat ini limbah biji durian belum dimanfaatkan secara optimal padahal memiliki banyak manfaat yang diberikan biji durian tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan dan kemiripan kandungan gizi biji durian yang terdapat pada empat varietas durian yaitu durian Sipenyengat, Simandam, Sibalau, dan Sisanggan. Penelitian ini menggunakan rancangan acak kelompok (RAK), data yang dihasilkan dianalisis secara kuantitatif dengan membandingkan komposisi gizi diantara empat varietas biji durian, dan dibandingkan  dengan data yang terdapat pada Direktorat Gizi Departemen Kesehatan RI tahun 2015, dan dijelaskan secara deskriptif serta diuji secara statistik dengan uji normalitas menurut kolmogorov smirnov dan uji homogenitas menurut Levene, dilanjutkan dengan analisis ragam (ANOVA) (α=5%), dan uji perbandingan berganda DMRT. Untuk mengetahui kemiripan kandungan gizi digunakan aplikasi MVSP versi 3.22. Hasil penelitian menyatakan bahwa kandungan gizi biji empat varietas durian memiliki perbedaan nyata khususnya pada karbohidrat, lemak, serat kasar,  total gula,kadar air, kadar abu dan vitamin C sedangkan kandungan protein, kalori dan mineralnya sama atau berbeda tidak nyata, dan terdapat kemiripan kandungan gizi pada biji empat varietas durian yang ada di Kecamatan Karang Intan Kabupaten Banjar.