Buah durian (Durio zibethinus Murr.) memiliki banyak manfaat bagi tubuh. Kandungan proksimat, vitamin C, kalori dan mineral berperan sebagai pengatur proses metabolisme dan kesehatan reproduksi. Informasi mengenai kandungan gizi daging buah Durio zibethinus Murr. secara umum sudah banyak diteliti, akan tetapi informasi kandungan gizi pada varietas durian di Kalimantan Selatan masih belum tersedia secara memadai. Tujuan penelitian ini untuk menganalisis perbedaan kandungan gizi buah durian varietas Sisirih, Sipenganten, Sijanar dan Sibelimbing serta kemiripan berdasarkan kandungan gizi empat varietas tersebut. Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAK) dan dianalisis secara kuantitatif dan kualitatif. Analisis kuantitatif dengan uji normalitas, homogenitas, analisisragam (ANOVA dengan α 5%) dan perbandingan berganda (DMRT), sedangkan analisis kualitatif menggunakan aplikasi MVSP dengan hasil akhir berupa dendogram cluster UPGMA. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kandungan gizi daging buah durian Sisirih, Sipenganten, Sijanar, dan Sibelimbing memiliki perbedaan nyata pada kandungan lemak, serat kasar, protein dan vitamin C, sedangkan kandungan air, abu, total pati, karbohidrat, kalori dan mineral berbeda tidak nyata. Tingkat kemiripan kandungan gizi empat varietas buah durian yaitu kelompok 1 adalah varietas durian Sirih dan Sijanar, dan kelompok 2 adalah varietas Sibelimbing dan Sipengantin.