Penelitian ini bertujuan untuk menjelaskan interaksi klorpirifos terhadap Human Serum Albumin(HSA) dengan metode Ultraviolet Visible Spectroscopy (UV-Vis) secara in vitro. Penelitian ini bersifat eksperimental dengan posttest-only with control group design yang terdiri 4 kelompok, Satu kelompok kontrol  Human Serum Albumin (HSA) dan  tiga kelompok konsentrasi klorpirifos yang diencerkan menggunakan normal saline. Setelah itu diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37° C dan absorbansi diukur pada panjang gelombang 250-295 nm. Data hasil absorbansi disajikan dalam bentuk tabel dan grafik. Dari tabel dan grafik akan dihitung nilai konstanta(K), konstanta menunjukkan ikatan kuat maupun lemahnya pengikatan klorpirifos dengan HSA. Konstanta didapat pada asam amino K _sistein -786,901, K _tirosin -331,589 dan K _triptofan -629,645. K negatif menandakan adanya interaksi klorpirifos-HSA tumpang tindih pada sub-domain HSA. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan konsentrasi klorpirifos dapat meningkatkan absorbansi dengan ditandai adanya penurunan pada grafik. Kesimpulannya, penambahan klorpirifos dapat menyebabkan perubahan struktur asam amino sistein, tirosin dan triptofan dalam HSA.