Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri patogen yang dapat menimbulkan penyakit jika masuk dalam tubuh manusia. Bahaya yang dapat ditimbulkan oleh bakteri P. aeruginosa menjadi alasan harus dilakukan pengujian mikrobiologi untuk memastikan keamanan mutu dan kelayakan produk obat tradisional. Obat tradisional yang diuji adalah jamu yang merupakan bahan atau ramuan bahan yang berupa tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan sarian (galenik), atau campuran dari bahan tersebut yang secara turun temurun telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman. Tujuan penelitian ini adalah mengetahui ada atau  tidaknya P. aeruginosa dalam sampel jamu. Pengujian melalui 2 tahap yaitu pengkayaan dan isolasi. Tahap pengkayaan bertujuan untuk menumbuhkan dan  mengaktifkan mikroorganisme sedangkan tahapan  isolasi bertujuan untuk memisahkan mikroba dari lingkungannya dan menumbuhkannya sebagai biakan  murni.  Metode yang digunakan untuk identifikasi adalah metode cawan gores sehingga yang diamati adalah pertumbuhan koloni pada media. Hasil pengujian menujukkan bahwa sampel OT.215, OT.220, dan OT.223 tidak terjadi pertumbuhan koloni dan memenuhi persyaratan aman dari bakteriP. aeruginosasesuai dengan Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Nomor 12 tahun 2014 tentang Mutu Obat Tradisional.