Pempek merupakan produk olahan ikan yang didinginkan dan disimpan pada suhu ruangan setelah dimasak dan bersentuhan dengan tangan manusia pada saat dijual dan disajikan, sehingga dapat terkontaminasi S. aureus. Pengujian S. aureus pada pempek merupakan syarat keamanan mutu produk pempek sesuai dengan SNI 7661:2019 dengan batas maksimal 10³ koloni/g sebagai syarat kemanan mutu produk pempek.  Pada pengujian S.aureus ini sampel pempek lenjer ikan tenggiri di simpan pada suhu ruang selama tiga hari agar mengetahui cemaran pada bakteri S.aureus yang terdapat pada pempek lenjer ikan tenggiri.  Rancangan penelitian yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok (RAK) yang terdiri dari 3 perlakuan dan 3 kelompok. Tujuan penelitian adalah untuk mengetahui cemaran bakteri Staphylococcus aureus pada  pempek dalam penyimpanan pada suhu ruang selama tiga hari dari UMKM Martapura. Pengolahan data dalam penelitian ini menggunakan uji binominal. Hasil penelitian yang telah dilakukan dengan pengujian secara mikrobiologi terdapat 3 sampel dengan lama waktu simpan 24, 48, dan 72 jam yang berasal dari 1 UMKM positif tercemaran bakteri S.aureus dengan angka kisaran cemaran yaitu 4,1 x10⁶ CFU/ml sampai 8,5 x 10⁶ CFU/ml. Sedangkan 6 sampel dari 2 UMKM yang lain dinyatakan negatif mengandung bakteri S.aureus.

Kata kunci: Staphylococcus aureus, Pempek lenjer ikan tenggiri, dan UMKM