Pembelajaran abad 21 menuntut kreativitas dan inovasi dalam ide digitalisasi bahan ajar untuk memfasilitasi kompetensi 6C peserta didik. Bahan ajar yang dipilih adalah E-Handout. Penelitian ini bertujuan untuk mendeskripsikan kesesuaian, kelayakan, dan keterbacaan hasil dari Pengembangan Bahan Ajar Konsep Pengantar Bioteknologi Untuk Peserta Didik Fase E (SMA) Berbentuk E-Handout. Penelitian ini menggunakan model 4D Thiagarajan et al. (1974). Teknik pengumpulan data menggunakan instrumen validasi kesesuaian, kelayakan, dan keterbacaan peserta didik. Subjek uji kesesuaian dan kelayakan terdiri atas 3 orang validator. Subjek uji keterbacaan terdiri atas 9 orang peserta didik kelas XI-4 SMAN 4 Banjarmasin T.A. 2023/2024. Hasil penelitian “Pengembangan Bahan Ajar Konsep Pengantar Bioteknologi Untuk Peserta Didik Fase E (SMA) Berbentuk E-Handout” memperoleh : (1) rata-rata skor kesesuaian sebesar 4,62 yang tergolong “sangat sesuai” artinya E-Handout ini telah sesuai dengan tujuan pembelajaran, isi, contoh-contoh, bahasa, format, dan penyajian. (2) Rata-rata skor kelayakan sebesar 4,58 yang tergolong “sangat layak” artinya E-Handout ini telah layak digunakan dalam pembelajaran. (3) Rata-rata skor keterbacaan sebesar 4,59 yang tergolong “sangat baik” artinya E-Handout ini sangat baik dan mudah dibaca oleh peserta didik. Hal ini menunjukkan E-Handout yang telah dikembangkan dapat menunjang pembelajaran konsep Pengantar Bioteknologi.