Pemberian vaksin heat killed A. hydrophila adalah salah satu upaya dalam pencegahan dan pengendalian serangan penyakit Motile aeromonad septicemia (MAS). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh vaksin heat killed terhadap relative percent survival (RPS), rerata waktu kematian (RWK) serta mengetahui dosis optimal untuk vaksinasi. Vaksin dibuat dengan metode heat killed dan variasi dosis vaksin dilakukan dengan cara serial dilution 10⁹, 10⁸, 10⁷ dan 10⁶ sel/mL. Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 5 perlakuan dan 3 ulangan, yaitu 4 perlakuan dosis vaksin 10⁹, 10⁸, 10⁷, 10⁶ sel/mL dan 1 perlakuan kontrol (PBS pH 7,0). Parameter yang diamati meliputi RPS, mortalitas, RWK, gejala klinis eksternal dan internal, dan kualitas air. Hasil penelitian menunjukkan pemberian vaksin dengan variasi dosis yang berbeda tidak berpengaruh nyata terhadap parameter RPS(81,33 – 100%) dan RWK divaksin (24 – 34 jam), sedangkan kontrol memiliki RWK terpanjang (39 jam).Mortalitas ikan yang divaksin (5,56 – 16,67 %) dan kontrol (88,9%) menunjukkan hasil yang berpengaruh nyata. Gejala klinis eksternal dan internal yang muncul setelah dilakukan uji tantang, yaitu nodul, nekrosis, ekses lendir, luka kemerahan, cairan kuning berbau busuk, anus kemerahan dan hati yang membengkak.  Kualitas air selama penelitian masih dalam kisaran normal untuk kehidupan ikan lele. Dosis vaksin heat killed A. hydrophila yang terbaik terdapat pada perlakuan  10⁶ sel/mL.

Kata Kunci: Aeromonas hydrophila, Clarias sp, dosis, vaksin heat killed