Latar Belakang : Larutan kitosan tulang ikan papuyu (Anabas testudineus) dapat digunakan untuk mempertahankan struktur gigi dengan cara mengurangi kecepatan kelarutan hidroksiapatit atau mencegah demineralisasi gigi pada kondisi asam. Tujuan: Menganalisis pengaruh perendaman larutan kitosan tulang papuyu (Anabas testudineus) 2,5%, dan 5% terhadap pelepasan kalsium (Ca) dan Fosfat (Po) gigi premolar. Metode: Penelitian ini menggunakan metode true eksperimental dengan rancangan post-test only with control group design yang terdiri dari 3 kelompok perlakuan yaitu kelompok kontrol negatif, perlakuan 1 konsentrasi 2,5% dan perlakuan 2 konsentrasi  5%. Masing-masing perlakuan direndam dalam larutan asam laktat pH 5,2 kemudian dilakukan pembacaan nilai kalsium dan fosfat yang terlepas menggunakan spektrofotometri UV-Visible (UV-Vis). Hasil: Hasil dari analisa data menggunakan uji Post Hoc Bonferroni maupun Post Hoc Mann-Whitney menunjukkan bahwa terdapat perbedaan bermakna antara kelompok kontrol dan perlakuan. Hasil penelitian ini menunjukkan terjadi penurunan kadar kalsium dan fosfat yang terlepas setelah dilakukan perendaman menggunakan kitosan tulang ikan papuyu (Anabas testudineus. Semakin tinggi konsentrasi kitosan yang digunakan maka semakin rendah kadar kalsium maupun fosfat yang terlepas pada gigi.  Kesimpulan:Kitosan tulang ikan papuyu (Anabas testudineus) konsentrasi 2,5% dan 5% mampu menghambat pelepasan kalsium dan fosfat pada gigi dan berpotensi sebagai biomaterial dalam menghambat demineralisasi.