Latar Belakang: Karies gigi merupakan masalah kesehatan global yang signifikan, terutama di Asia Tenggara. Prevalensi karies di Indonesia bahkan mencapai 82,8%. Penyakit ini disebabkan oleh mikroorganisme, terutama Streptococcus mutans, yang berperan dalam pembentukan biofilm. Kitosan memiliki aktivitas antibakteri yang baik sehingga kitosan sering digunakan pada pengaplikasian biomedis. Pengembangan nanopartikel kitosan diharapkan dapat meningkatkan efektivitasnya terhadap bakteri Streptococcus mutans. Tujuan: Mengukur dan menganalisis aktivitas antibakteri nanopartikel kitosan dari sisik ikan haruan (Channa striata) terhadap bakteri Streptococcus mutans ATCC 25175. Metode: Desain penelitian ini adalah penelitian eksperimental murni dengan post test only with control group design. Penelitian ini menggunakan 5 kelompok perlakuan yaitu nanopartikel kitosan sisik ikan haruan konsentrasi 0,125%, 0,25%, 0,5%, minyak atsiri sebagai kontrol positif, dan asam asetat 0,1% sebagai kontrol negatif dengan 5 kali pengulangan pada setiap perlakuan. Uji antibakteri dilakukan dengan metode dilusi cair untuk menentukan KHM dan dilusi padat untuk menentukan KBM. Hasil: Nilai KHM nanopartikel kitosan sisik ikan haruan terdapat pada konsentrasi 0,125% dengan nilai absorbansi sebesar -0,012 dan nilai KBM pada konsentrasi 0,5% dengan tidak adanya pertumbuhan koloni bakteri. Hasil uji ukuran partikel menggunakan Particle Size Analyzer (PSA) memenuhi parameter kriteria menurut International Organization for Standarization (ISO) dengan ukuran partikel yaitu 50,79-92,89 nm. Kesimpulan: Nanopartikel kitosan sisik ikan haruan (Channa striata) memiliki aktivitas antibakteri dalam menghambat bakteri Streptococcus mutans ATCC 25175.