Jeruk nipis (Citrus aurantifolia Swingle) secara luas dibudidayakan sebagai tanaman hortikultura karena kegunaannya dalam meningkatkan cita rasa makanan dan minuman. Namun, keterbatasan ketersediaan bibit yang seragam dan berkualitas tinggi sering kali menjadi hambatan dalam budidaya secara komersial. Perbanyakan vegetatif melalui stek batang merupakan salah satu alternatif, meskipun proses perakaran cenderung berlangsung lambat tanpa adanya intervensi dari luar. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi pengaruh berbagai bentuk aplikasi Rootone-F terhadap pertumbuhan awal stek batang jeruk nipis. Penelitian dilaksanakan dengan menggunakan Rancangan Acak Kelompok (RAK) dengan lima perlakuan, yaitu kontrol (R0), Rootone-F bentuk pasta (R1), bentuk tepung (R2), larutan yang digunakan pertama kali (R3), dan larutan yang digunakan ulang (R4). Parameter yang diamati meliputi waktu muncul tunas, jumlah tunas, panjang tunas, dan persentase tumbuh. Hasil analisis statistik menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan antar perlakuan pada semua parameter. Meskipun demikian, perlakuan R0 menunjukkan waktu kemunculan tunas tercepat, sedangkan perlakuan R3 menghasilkan nilai rata-rata tertinggi pada jumlah tunas, panjang tunas, dan persentase tumbuh. Temuan ini mengindikasikan bahwa kondisi fisiologis internal bahan tanam dapat berperan lebih dominan dibandingkan aplikasi zat pengatur tumbuh sintetis pada fase awal pertumbuhan stek.