Hipertensi merupakan salah satu penyakit degeneratif dengan prevalensi tinggi. Ekstrak jintan hitam (Nigella sativa L.) mengandung senyawa fenolik yang berpotensi menurunkan tekanan darah, tetapi memiliki kemampuan penetrasi kulit yang rendah. Microneedle patch sebagai sediaan transdermal dapat mengatasi hambatan ini dan dibantu dengan kitosan sebagai enhancer penetrasi alami.  Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh variasi konsentrasi kitosan terhadap jumlah kumulatif fenolik total yang terpenetrasi dan kecepatan penetrasi (fluks) dari ekstrak jintan hitam dalam sediaan microneedle patch. Empat formula digunakan, yaitu F1–F3 mengandung kitosan dengan konsentrasi berbeda dan F4 tanpa kitosan. Penetapan kadar fenolik total menggunakan reagen Folin-Ciocalteu diperoleh hasil sebesar 3,1361 %b/b EAG. Uji penetrasi menggunakan sel difusi Franz menunjukkan rerata jumlah kumulatif fenolik total terpenetrasi secara berturut-turut sebesar 51,9362 ± 1,2472; 55,5186 ± 0,1741; 59,1292 ± 0,1140; dan 46,0756 ± 0,1888. Rerata fluks berturut-turut sebesar 1,7561 ± 0,0123; 1,9067 ± 0,0025; 2,1392 ± 0,0006; dan 1,6288 ± 0,0033. Penelitian disimpulkan bahwa variasi konsentrasi kitosan berpengaruh terhadap jumlah kumulatif fenolik total terpenetrasi, namun tidak berpengaruh terhadap kecepatan penetrasinya (fluks).