Jenis penyakit ikan lele dumbo yang paling sering dijumpai adalah penyakit bakterial yang disebabkan oleh bakteri Aeromonas hydrophila. Penggunaan antibiotik sering digunakan dalam pengendalian penyakit ikan. Namun hal tersebut mengakibatkan dampak negatif, yaitu menyebabkan bakteri-bakteri di lingkungan menjadi resisten terhadap antibiotik serta bersifat residu pada ikan. Salah satu tumbuhan herbal yang berpotensi sebagai antibakteri, yaitu daun paku kaki tupai (Davallia denticulata). Penelitian ini dilakukan bertujuan untuk mengetahui potensi daun paku kaki tupai sebagai antibakteri A. hydrophila, fitokimia, dan toksisitas ekstrak daun paku kaki tupai yang diinjeksikan pada ikan lele dumbo (Clarias gariepinus). Metode dalam penelitian ini adalah eksperimental dengan Rangkaian Acak Lengkap (RAL) dengan 5 perlakuan dan 3 ulangan, yaitu perlakuan K (0 ppm), A (200 ppm), B (300 ppm), C (400 ppm), dan D (500 ppm). Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak daun paku kaki tupai pelarut metanol menunjukkan hasil dengan rerata 4,8 mm, daun paku kaki tupai memiliki senyawa tanin, dan saponin, serta tidak bersifat toksik pada perlakuan A dan B berdasarkan parameter tingkah laku, gejala klinis, RWK, mortalitas, sintasan dan uji hematologis. Namun bersifat toksik pada perlakuan C dan D berdasarkan parameter tingkah laku, gejala klinis, RWK, mortalitas, sintasan dan uji hematologis.