Nematoda puru akar merupakan salah satu patogen penting pada tanaman budidaya yang dapat menimbulkan kerugian signifikan. Pengendalian menggunakan pestisida kimia berpotensi menimbulkan dampak lingkungan, sehingga diperlukan alternatif yang lebih berkelanjutan, salah satunya melalui pemanfaatan bakteri kitinolitik yang mampu mendegradasi kitin pada telur nematoda. Penelitian ini bertujuan mengidentifikasi isolat bakteri kitinolitik dari sedimen sungai yang berpotensi menghambat penetasan telur nematoda puru akar (Meloidogyne spp.) secara in vitro. Penelitian disusun menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) satu faktor dengan lima perlakuan dan satu kontrol (tanpa perlakuan), masing-masing diulang tiga kali. Isolasi bakteri dilakukan dari sedimen sungai di Kecamatan Aluh-Aluh Kabupaten Banjar Kalimantan Selatan. Sebanyak 17 isolat berhasil diperoleh dan lima isolat terpilih berdasarkan nilai indeks kitinolitik (IK) ≥ 2. Uji aktivitas nematisidal menunjukkan bahwa isolat BKS5a pada konsentrasi 0,2 ml menghasilkan tingkat penghambatan penetasan telur tertinggi yaitu 46%. Temuan ini menegaskan bahwa bakteri kitinolitik berpotensi dikembangkan sebagai agen pengendali hayati ramah lingkungan untuk menekan penyakit puru akar pada tanaman budidaya.

Kata kunci: Bakteri kitinolitik, sedimen sungai, Meloidogyne spp., in vitro.