Penelitian ini bertujuan menganalisis perubahan profil asam amino kue akar pinang akibat substitusi daging ikan kembung (Rastrelliger sp.). Penelitian dilakukan menggunakan tiga taraf substitusi daging ikan kembung, yaitu 0%, 15%, dan 30%. Analisis profil asam amino dilakukan menggunakan metode High Performance Liquid Chromatography (HPLC) terhadap komponen esensial dan non esensial. Hasil penelitian menunjukkan peningkatan total asam amino seiring meningkatnya substitusi ikan kembung. Nilai kontrol sebesar 7,61 meningkat menjadi 10,23 pada substitusi 15% dan 13,74 pada substitusi 30%. Histidin merupakan komponen dominan pada kelompok esensial, sedangkan asam glutamat merupakan komponen terbesar pada kelompok non esensial. Substitusi ikan kembung efektif meningkatkan nilai protein kue akar pinang melalui peningkatan asam amino.