Kanker payudara dengan tingkat mortalitas tinggi mendorong perlunya eksplorasi agen antikanker dari bahan alam. Penelitian ini bertujuan menguji aktivitas sitotoksik fraksi etil asetat kulit buah limau kuit (Citrus amblycarpa Hassk.) terhadap sel kanker payudara T47D. Penelitian eksperimental ini menggunakan metode MTT assay. Fraksinasi dilakukan secara cair-cair dengan rendemen sebesar 20%. Sel T47D diberi perlakuan konsentrasi bertingkat, kemudian viabilitasnya diukur menggunakan ELISA reader dan dianalisis melalui uji probit. Fraksi etil asetat mampu menurunkan viabilitas sel T47D secara dose-dependent. Diperoleh nilai IC50? sebesar 78,37 µg/mL, yang dikategorikan sebagai aktivitas sitotoksik “aktif sedang” menurut standar National Cancer Institute. Selain itu, pengamatan mikroskopis menunjukkan perubahan morfologi khas apoptosis, seperti cell shrinkage dan pembentukan apoptotic bodies. Fraksi etil asetat kulit buah limau kuit memiliki aktivitas sitotoksik yang signifikan terhadap sel T47D. Temuan ini menunjukkan potensi limau kuit untuk dikembangkan sebagai kandidat agen antikanker alami di masa depan.