Ikan kembung (Rastrelliger sp.) adalah jenis ikan yang berpotensi meningkatkan nilai gizi produk pangan tradisional yang memiliki kandungan protein dan asam lemak tak jenuh yang baik untuk tubuh. Salah satu upaya pemanfaatannya adalah melalui substitusi daging ikan kembung pada kue akar pinang. Penelitian ini memiliki tujuan untuk mengetahui pengaruh substitusi daging ikan kembung dengan tingkat yang berbeda terhadap profil asam lemak kue akar pinang. Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan tiga perlakuan, yaitu tanpa substitusi (0%) sebagai kontrol, substitusi 15%, dan substitusi 30% daging ikan kembung. Analisis profil asam lemak dilakukan secara kuantitatif menggunakan metode transesterifikasi dengan katalis boron trifluorida (BF3) dan dianalisis menggunakan kromatografi gas (GC). Data dianalisis secara deskriptif berdasarkan pola perubahan fraksi asam lemak. Hasil dari  penelitian menunjukkan bahwa substitusi daging ikan kembung memengaruhi profil asam lemak kue akar pinang. Perlakuan kontrol didominasi oleh asam lemak jenuh (SFA), terutama asam palmitat. Substitusi daging ikan kembung 15% dan 30% menyebabkan peningkatan fraksi asam lemak tak jenuh tunggal, Asam lemak tak jenuh ganda, dan penurunan pada kandungan asam lemak jenuh. Perlakuan dengan substitusi 15% menghasilkan total asam lemak tertinggi sebesar 98,64%, sedangkan substitusi 30% menunjukkan kandungan MUFA dan PUFA relatif lebih tinggi dibandingkan kontrol. Dapat disimpulkan bahwa substitusi daging ikan kembung pada kue akar pinang mampu memperbaiki profil asam lemak dengan meningkatkan kandungan asam lemak tak jenuh, sehingga berpotensi menghasilkan produk pangan tradisional yang lebih bernilai gizi