Seiring dengan meningkatnya kasus penyakit degeneratif yang dipicu stres oksidatif, pencarian sumber antioksidan alami dari mikroorganisme menjadi semakin penting. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi potensi Bacillus cereus ULM-A5 sebagai sumber alami penghasil senyawa antioksidan untuk pengembangan bahan aktif meredam radikal bebas. Isolasi metabolit sekunder dilakukan dengan menumbuhkan kultur selama 49 jam untuk mencapai fase stasioner, kemudian mengekstraksi metabolit menggunakan metode ekstraksi cair-cair dengan pelarut etil asetat. Senyawa yang terkandung dianalisis menggunakan GC-MS. Hasil GC-MS menunjukkan adanya 107 senyawa metabolit sekunder dengan lima senyawa terpilih berdasarkan persen area dan skor kemiripan struktur terhadap pustaka, yaitu pirolo[1,2-a]pirazin-1,4-dion,heksahidro-3(2-metilpropil); hentriakontan; siklo(L-prolil-L-valin); heksahidro-3-(1-metilpropil)pirolo[1,2-a]pirazin-1,4-dion; dan tetrakosana. Aktivitas antioksidan dari ekstrak etil asetat (EtOAc) dievaluasi menggunakan metode DPPH pada panjang gelombang maksimum 516 nm dengan variasi konsentrasi 78,125–1250 ppm dan dibandingkan dengan standar asam galat.Sampel ekstrak EtOAc metabolit sekunder B. cereus ULM-A5 memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC₅₀ yang dihasilkan sebesar 23,031 ppm, sedangkan untuk asam galat memiliki nilai IC₅₀ sebesar 0,068 ppm. Hal ini juga menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan yang dimiliki oleh sampel ekstrak EtOAc metabolit sekunder dari B. cereus ULM-A5 dan standar asam galat mempunyai kemampuan meredam radikal bebas yang sangat kuat (IC₅₀ <50 ppm). Hasil ini menyatakan bahwa ekstrak EtOAc metabolit sekunder dari Bacillus cereus ULM-A5 memiliki potensi sebagai sumber antioksidan alami dan berpeluang dikembangkan lebih lanjut dalam bidang farmasi maupun kesehatan.

Kata kunci: Bacillus cereus ULM-A5, metabolit sekunder, antioksidan, GC-MS, DPPH