Mikroorganisme tanah, khususnya beragam bakteri dan jamur mikroskopis, memiliki peran penting dalam proses dekomposisi dan siklus hara. Ragam koloni bakteri dan jamur mikroskopis di Taman Biodiversitas Hutan Hujan Tropis Lembah Bukit Manjai berpotensi dimanfaatkan sebagai bahan ajar berbasis potensi lokal dalam bentuk e-handout. Penelitian ini bertujuan untuk mendeskripsikan ragam koloni bakteri dan jamur mikroskopis serta proses pengembangan, validitas, dan keterbacaan e-handout sebagai bahan ajar penunjang mata kuliah Mikrobiologi. Penelitian dilakukan melalui pengambilan sampel tanah pada empat lokasi pengamatan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa (1) diperoleh 21 koloni bakteri dan 3 koloni jamur mikroskopis dari sampel tanah yang diamati, (2) proses pengembangan e-handout sudah sesuai dengan tahapan model pengembangan Plomp and Nieveen (2013) yang terdiri atas tiga fase, yaitu preliminary research (analisis pendahuluan), prototyping phase (pembuatan prototipe), dan assessment (fase penilaian), dan (3) e-handout yang dikembangkan memperoleh skor validitas sebesar 3,96 dengan kriteria sangat valid dan skor keterbacaan mahasiswa sebesar 3,81 dengan kriteria sangat baik. Dengan demikian, e-handout ragam koloni bakteri dan jamur mikroskopis memenuhi kriteria valid dan keterbacaan untuk dapat  dilakukan penelitian lanjutan uji keefektifan produk yang dapat digunakan  sebagai bahan ajar penunjang pembelajaran Mikrobiologi.

Kata kunci: E-handout, jamur mikroskopis, koloni bakteri. model Plomp and Nieveen, Taman Biodiversitas Bukit Manjai.