Latar Belakang: Enterococcus faecalis merupakan bakteri yang sering ditemukan pada kegagalan perawatan endodontik karena kemampuannya bertahan terhadap bahan irigasi konvensional. Oleh karena itu, diperlukan alternatif bahan antibakteri yang efektif dan biokompatibel. Daun galam (Melaleuca cajuputi subsp. Cumingiana Barlow), yang banyak ditemukan di Indonesia, memiliki potensi sebagai agen antibakteri alami, namun pemanfaatannya terhadap E. faecalis masih terbatas. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi aktivitas antibakteri ekstrak daun galam pada berbagai konsentrasi terhadap pertumbuhan E. faecalis. Metode: Penelitian eksperimental murni dengan rancangan post-test only control group design dilakukan menggunakan enam kelompok perlakuan, yaitu ekstrak daun galam konsentrasi 25%, 50%, 75%, dan 100%, kontrol positif (NaOCl 2,5%), serta kontrol negatif (akuades), masing-masing dengan lima replikasi. Uji antibakteri dilakukan menggunakan metode difusi cakram (Kirby-Bauer) pada media Mueller Hinton Agar dengan suspensi E. faecalis standar McFarland 0,5, kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Data dianalisis menggunakan uji Kruskal-Wallis dan uji lanjut Mann-Whitney. Hasil: Rata-rata diameter zona hambat pada konsentrasi 25%, 50%, 75%, 100%, dan NaOCl 2,5% berturut-turut adalah 6,32 mm; 6,60 mm; 9,44 mm; 10,18 mm; dan 4,30 mm. Analisis statistik menunjukkan terdapat perbedaan bermakna antar kelompok (p < 0,05), kecuali antara konsentrasi 25% dengan 50% serta 75% dengan 100%. Kesimpulan: Ekstrak daun galam menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap E. faecalis yang meningkat seiring dengan peningkatan konsentrasi. Temuan ini menunjukkan potensi ekstrak daun galam sebagai alternatif bahan antibakteri alami dalam perawatan saluran akar yang lebih biokompatibel.