Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji pemanfaatan tumbuhan berkhasiat obat oleh masyarakat Suku Dayak Ot Danum di Desa Muara Joloi II, Kabupaten Murung Raya, Kalimantan Tengah, meliputi jenis tumbuhan, bagian yang dimanfaatkan, cara pengolahan, cara penggunaan, serta persepsi masyarakat terhadap pengobatan tradisional. Penelitian dilaksanakan selama bulan April–Juni 2025 menggunakan metode kualitatif dan kuantitatif deskriptif dengan teknik wawancara mendalam, observasi partisipatif, dan kuesioner. Penentuan informan dilakukan secara purposive sampling terhadap empat orang batra (dukun adat) serta responden masyarakat yang pernah melakukan pengobatan tradisional. Hasil penelitian menunjukkan bahwa masyarakat Suku Dayak Ot Danum memanfaatkan 39 jenis tumbuhan obat yang berasal dari pekarangan, kebun, dan hutan sekitar. Bagian tumbuhan yang paling banyak digunakan adalah daun, diikuti oleh akar, batang, bunga, dan rimpang. Cara pengolahan yang umum dilakukan meliputi perebusan, penumbukan, pemerasan, dan penggunaan langsung, sedangkan cara pemanfaatan dilakukan dengan diminum, dioleskan, dan ditempelkan. Persepsi masyarakat terhadap pengobatan tradisional umumnya positif karena dianggap aman, mudah diperoleh, dan telah terbukti secara turun-temurun. Pengetahuan etnobotani masyarakat Suku Dayak Ot Danum masih terjaga dengan baik dan berperan penting dalam sistem pengobatan lokal, sehingga perlu dilestarikan sebagai bagian dari kearifan lokal dan potensi pengembangan obat tradisional berbasis sumber daya hayati.