Diabetes merupakan penyakit tidak menular dengan prevalensi tinggi. Benalu batu (Paraboea kalimantanensis) secara empiris digunakan untuk pengobatan berbagai penyakit memiliki potensi sebagai alternatif agen penurunan kadar glukosa darah karena diketahui memiliki kandungan, seperti alkaloid, saponin, flavonoid, triterpenoid, steroid, fenolik, dan tanin. Penelitian ini bertujuan mengidentifikasi aktivitas penurunan kadar glukosa darah, menentukan konsentrasi dosis yang dapat memberikan efek penurunan kadar glukosa darah terbesar pada masing-masing fraksi, dan membandingkan aktivitas penurunan kadar glukosa darah antara fraksi etil asetat dan n-butanol daun benalu batu (P. kalimantanensis) menggunakan metode TTGO. Optimasi dosis dilakukan pada dosis 100–500 mg/kgBB. Uji TTGO dilakukan pada 7 kelompok (5 ekor tikus/kelompok), yaitu kontrol normal, kontrol negatif (Na-CMC), kontrol positif (metformin), dan kelompok dosis fraksi etil asetat dan n-butanol dengan dosis 300 dan 400 mg/kgBB. Larutan uji diberikan secara oral, diikuti pemberian dekstrosa (D40) setelah 30 menit. Kadar glukosa darah diukur pada menit ke-0, 30, 60, 90, dan 120 menggunakan GCU meter. Hasil menunjukkan fraksi etil asetat dan n-butanol dosis 300 dan 400 mg/kgBB menunjukkan aktivitas penurunan kadar glukosa darah dengan nilai AUC_0-120 berturut-turut 15.534, 14.277, 14.739, dan 15.198 mg/dL·menit yang secara statistik berbeda bermakna dibanding kontrol negatif (p < 0,05) dan tidak berbeda bermakna dengan kontrol positif (p > 0,05) di mana dosis 400 mg/kgBB merupakan dosis terbaik pada fraksi etil asetat dan dosis 300 mg/kgBB merupakan dosis terbaik pada fraksi n-butanol, serta tidak terdapat perbedaan aktivitas penurunan kadar glukosa darah dengan nilai signifikansi antar kelompok (p > 0,05).