Lambai-Lambai (Cayratia trifolia L.) merupakan tumbuhan liar di Kalimantan Selatan yang berpotensi dikembangkan sebagai bahan baku obat tradisional. Penelitian ini bertujuan untuk menetapkan uji parameter spesifik dan non spesifik simplisia dan ekstrak daun lambai-lambai. Metode yang digunakan mengacu pada Farmakope Herbal Indonesia dan Parameter Standar Umum Ekstrak. Pengambilan sampel dilakukan pada tiga tempat tumbuh yang berbeda yaitu Desa Muara Halayung, Kecamatan Beruntung Baru, Kabupaten Banjar, Desa Sungai Tulang Ulu, Kecamatan Astambul, Kabupaten Banjar, dan Desa Ujung Baru, Kecamatan Bati-Bati, Kabupaten Tanah Laut. Hasil penelitian menunjukkan bahwa standardisasi simplisia secara organoleptik berbentuk serbuk, berwarna hijau pekat dan kecokelatan, berbau khas, dan tidak berasa. Pengujian mikroskopik menunjukkan adanya sel epidermis, hipodermis, mesofil, rongga udara, berkas pembuluh, dan stomata. Pengujian makroskopik menunjukkan daun berwarna hijau dengan bentuk bulat seperti telur, duduk daun berselang-seling, permukaan daun mengkilat, tepi daun bergerigi besar, dan tulang daun menyirip. Kadar sari larut etanol 2,00%−8,00%, kadar sari larut air 8,00%−10,00%, susut pengeringan 2,33%−4,00%, kadar abu total simplisia 10,50%-14,00%, cemaran logam timbal dan kadmium <0,001 mg/kg. Standardisasi ekstrak menunjukkan ekstrak berbentuk kental, berwarna hijau kecoklatan, berbau khas, dan rasa pahit. Ekstrak mengandung flavonoid, steroid, tanin, saponin, glikosida, antrakuinon, dan fenolik. Profil Kromatografi Lapis Tipis (KLT) menegaskan kesamaan kandungan senyawa kimia tiap lokasi tumbuh. Rendemen ekstrak 4,62%-7,92%, kadar abu total ekstrak 6,33%−10,60%, dan kadar abu tidak larut asam ekstrak 8,00%−9,00%. Hasil parameter standardisasi simplisia dan ekstrak daun C. trifolia L. dari ketiga tempat berbeda telah memenuhi syarat yang ditetapkan oleh Farmakope Herbal Indonesia, Materia Medika Indonesia, dan BPOM RI.