Sistem Manajemen Keselamatan dan Kesehatan Kerja (SMK3) merupakan faktor yang memegang peranan penting dalam menyelenggarakan upaya untuk mengendalikan dan meminimalisasi potensi risiko dan bahaya. Di RS Sari Mulia Banjarmasin terjadi kenaikan angka kecelakaan kerja pada karyawan dari tahun 2014 hingga 2017. Tujuan dari penelitian ini adalah menganalisis faktor-faktor yang berhubungan dengan persepsi penerapan SMK3 pada karyawan RS Sari Mulia Banjarmasin. Penelitian ini merupakan penelitian analitik kuantitatif dengan metode cross sectional. Populasi penelitian sebanyak 330 orang karyawan dengan jumlah sampel 75 orang responden. Variabel bebas adalah pengetahuan, pengalaman, motivasi, dan lingkungan kerja. Sedangkan variabel terikatnya adalah persepsi penerapan SMK3. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 53 orang responden (70,7%) mempunyai pengetahuan baik, 58 orang responden (77,3%) mempunyai pengalaman baik, 55 orang responden (73,3%) mempunyai motivasi baik, 56 orang responden (74,7%) merasakan lingkungan kerja baik, dan 51 orang responden (68%) mempunyai persepsi penerapan SMK3 baik. Berdasarkan uji statistik menggunakan uji chi square didapatkan bahwa ada hubungan antara pengetahuan (P=0,031), pengalaman (P=0,007), motivasi (P=0,010), dan lingkungan kerja (P=0,001) dengan persepsi penerapan SMK3. Perlu dilakukan sosialisasi dan pelatihan terkait bidang K3 RS, meningkatkan kesadaran karyawan serta meningkatkan komunikasi yang efektif antara manajemen dan karyawan.