Resitensi bakteri terhadap antibiotik konvensional telah menjadi tantangan kesehatan global yang memicu eksplorasi intensif mikroorganisme lingkungan sebagai sumber antibakteri baru. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis kurva pertumbuhan, memetakan profil komponen kimia menggunakan Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS), serta mengevaluasi potensi antibakteri dari ekstrak n-heksana metabolit sekunder bakteri Enterobacter cloacae ULM-F2 isolat lokal lahan gambut menggunakan metode uji difusi cakram (Kirby-Bauer). Penentuan kurva pertumbuhan dilakukan melalui pengukuran OD₆₀₀. Pemanenan metabolit sekunder dilakukan pada fase stasioner melalui ekstraksi cair-cair dengan pelarut n-heksana. Uji aktivitas antibakteri dilakukan terhadap bakteri target Escherichia coli (Gram-negatif) dan Staphylococcus aureus (Gram-positif). Hasil penentuan kurva pertumbuhan menunjukkan bahwa E. cloacae ULM-F2 mengalami fase lag, fase eksponensial, dan fase stasioner. Analisis GC-MS terhadap ekstrak n-heksana mendeteksi adanya beberapa puncak kromatogram dengan senyawa dominan yang memiliki kemiripan pustaka tinggi, yaitu phthalic acid, butyl hept-4-yl ester; phthalic acid, di(2-propylpentyl) ester; hexanedioic acid, bis(2-ethylhexyl) ester; β-sitosterol; stigmasterol; dan hentriacontane. Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak n-heksana E. cloacae ULM-F2 memiliki aktivitas hambatan selektif yang dikategorikan aktif terhadap E. coli berkarakteristik not clear (bakteriostatik). Sebaliknya, ekstrak dinyatakan tidak aktif terhadap S. aureus. Sifat selektivitas ini dipengaruhi oleh dominasi komponen senyawa non-polar hidrofobik di dalam ekstrak yang memiliki afinitas tinggi dalam merusak komponen lipid bilayer membran luar Gram-negatif, namun terhalang mempenetrasi dinding peptidoglikan tebal Gram-positif yang bersifat polar hidrofilik.