Air sungai yang terkontaminasi dengan bakteri patogen merupakan sumber dari berbagai macam infeksi. Klebsiella sp. merupakan salah satu bakteri yang dapat ditemukan di air dan merupakan bakteri penghasil Extended Spectrum Beta Lactamase (ESBL). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui keberadaan bakteri Klebsiella sp. penghasil ESBL di sungai-sungai yang ada di Kota Banjarmasin. Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan metode observasional deskriptif. Sampel air sungai dipilih dengan menggunakan teknik purposive sampling. Sebanyak 12 sampel air diperoleh dari 12 titik di 3 sungai yang berbeda. Jenis bakteri pada sampel air sungai diidentifikasi dengan metode konvensional dan dilanjutkan dengan Double Disc Synergy Test (DDST) untuk mengidentifikasi bakteri penghasil ESBL. Hasil dari penelitian ini didapatkan 3 jenis bakteri dengan total 12 isolat, yaitu 5 isolat Klebsiella sp. (41,67%), 5 isolat Proteus sp. (41,67%), dan 2 isolat Escherichia coli (16,66%). Kesimpulan dari penelitian ini adalah ditemukannya bakteri Klebsiella sp. namun tidak ditemukan bakteri Klebsiella sp. penghasil ESBL pada air sungai di Banjarmasin.