Rhizosfer tumbuhan memiliki keragaman mikroba yang berbeda. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui ragam koloni mikroba (fungi) pada rhizosfer tumbuhan dan untuk mendeskripsikan validasi, keterbacaan dan respon mahasiswa sebagai E-Booklet. Pengembangan E-Booklet ragam koloni mikroba (fungi) pada rhizosfer tanaman Capsicum frutescens dan Solanum melongena L. di Landasan Ulin Utara. Ragam koloni mikroba (fungi) yang didapatkan selanjutnya diidentifikasi sifat-sifat koloni berdasarkan literatur dan dikembangkan menjadi E-Booklet. Pengembangan E-Booklet dilakukan menggunakan model ADDIE. Subjek pada uji validasi dilakukan oleh 3 orang validator, uji keterbacaan dan respon mahasiswa dilakukan oleh 12 orang mahasiswa yang telah lulus memprogramkan mata kuliah Mikrobiologi di Program Studi Pendidikan Biologi PMIPA FKIP ULM Banjarmasin. Berdasarkan penelitian ditemukan 3 koloni jamur mikroskopis pada sampel tanah Capsicum frutescens dan 7 koloni jamur mikroskopis pada sampel tanah Solanum melongena L. yang tumbuh pada medium biakan. Pada uji validasi materi E-Booklet yang dikembangkan memperoleh persentase 98,75% (sangat valid) dan uji validasi media memperoleh persentase 78,66% (valid), artinya E-Booklet sudah layak digunakan sebagai bahan ajar. Pada uji keterbacaan memperoleh persentase 89,46% (sangat baik), artinya E-Booklet memudahkan mahasiswa untuk memahami materi-materi yang ada di dalamnya. Respon mahasiswa memperoleh persentase 90,17% (sangat baik), artinya E-Booklet sudah sangat baik digunakan oleh mahasiswa.