Pengobatan infeksi akibat Aeromonas hydrophila menggunakan bahan herbal lebih dianjurkan dibandingkan antibiotik sintetis. Salah satu bahan herbal yang diduga memiliki sifat antibakteri adalah supan-supan (Neptunia Oleracea L.). Penelitian ini mempunyai tujuan untuk menganalisis sifat antibakteri, fitokimia serta toksisitas ekstrak supan-supan yang diinjeksi pada ikan lele sangkuriang. Metode yang diterapkan ialah metode eksperimental, dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang melibatkan 5 perlakuan serta 3 ulangan meliputi K (tanpa tanpa penambahan ekstrak supan-supan), A (125 ppm), B (250 ppm), C (500 ppm) dan D (1.000 ppm). Hasil membuktikan bahwa ekstrak supan-supan memiliki potensi sebagai antibakteri Aeromonas hydrophila, mengandung alkaloid, flavonoid, tanin dan hidrokuinon serta bersifat toksik pada konsentrasi 500 dan 1.000 ppm berdasarkan parameter gejala klinis yang menimbulkan luka pada tubuh ikan seiring meningkatnya konsentrasi, meskipun demikian tidak mempengaruhi parameter tingkah laku, RWK, sintasan, mortalitas dan hematologis.

Kata kunci : Aeromonas hydrophila, lele sangkuriang, supan-supan