Inflamasi merupakan masalah kesehatan yang prevalensinya cukup tinggi di Indonesia dan umumnya ditangani menggunakan NSAID dan kortikosteroidyang penggunaan jangka panjangnya berpotensi menimbulkan efek samping serius. Daun kratom (Mitragyna speciosa) diketahui mengandung senyawa seperti alkaloid, flavonoid, dan fenolik yang berpotensi sebagai antiinflamasi. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas antiinflamasi fraksi etil asetat daun M. speciosa secara in vitro dan in vivo. Uji in vitro dilakukan menggunakan metode penghambatan denaturasi protein pada konsentrasi 25, 50, 75, 100, dan 125 ppm. Uji in vivo dilakukan menggunakan model edema kaki tikus yang diinduksi karagenandengan natrium diklofenak dosis 50 mg/70 kgBB sebagai kontrol positif dan fraksi etil asetat dosis 5, 10, 20, 40, dan 80 mg/kgBB sebagai kelompok perlakuan. Hasil uji in vitro menunjukkan bahwa fraksi etil asetat daun M. speciosa memiliki nilai IC?? sebesar 43,922 ± 0,640 ppm dan tergolong sangat kuat, serta menunjukkan perbedaan bermakna terhadap natrium diklofenak (p < 0,05). Hasil uji in vivo menunjukkan bahwa dosis 80 mg/kgBB menghasilkan persentase daya antiinflamasi tertinggi sebesar 60,480 ± 0,067% dan tidak berbeda bermakna dibandingkan natrium diklofenak (p ≥ 0,05). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa fraksi etil asetat daun M. speciosa berpotensi sebagai agen antiinflamasi secara in vitro dan in vivo.