Latar Belakang: Berdasarkan Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) tahun 2018, prevalensi karies gigi pada anak usia dini di Indonesia masih tergolong tinggi. Tingginya angka kejadian karies gigi pada anak dipengaruhi oleh berbagai faktor, salah satunya adalah rendahnya pengetahuan mengenai cara menjaga kesehatan gigi dan mulut. Upaya yang dilakukan untuk meningkatkan pengetahuan anak usia dini adalah melalui Dental Health Education (DHE) menggunakan media pembelajaran yang interaktif dan menarik, seperti busy book. Tujuan: Menganalisis pengaruh Dental Health Education menggunakan media busy book terhadap tingkat pengetahuan kesehatan gigi dan mulut pada anak usia 3-6 tahun di PAUD Terpadu Negeri Pembina Banjarmasin Tengah 2. Metode: Penelitian ini menggunakan metode pre experimental dengan rancangan one group pretest-posttest design dan teknik pengambilan sampel total sampling. Penelitian dilaksanakan di PAUD Terpadu Negeri Pembina Banjarmasin Tengah 2 dengan jumlah sampel sebanyak 74 anak usia 3-6 tahun. Pengukuran tingkat pengetahuan dilakukan menggunakan kuesioner bergambar yang terdiri dari 10 pertanyaan sebelum (pretest) dan sesudah (posttest) pemberian Dental Health Education menggunakan media busy book. Analisis data menggunakan uji wilcoxon. Hasil: Sebelum diberikan DHE menggunakan media busy book sebanyak 13 anak (17,6%) memiliki tingkat pengetahuan baik, 32 anak (43,2%) memiliki tingkat pengetahuan cukup dan 29 anak (39,2%) memiliki tingkat pengetahuan yang kurang. Setelah diberikan intervensi, sebanyak 42 anak (56,8%) memiliki tingkat pengetahuan baik, 28 anak (37,8%) pada kategori cukup dan 4 anak (5,4%) memiliki tingkat kategori pengetahuan yang kurang. Hasil uji wilcoxon menunjukkan terdapat perbedaan tingkat pengetahuan kesehatan gigi dan mulut sebelum dan sesudah pemberian DHE menggunakan media busy book (p=0,001). Kesimpulan: Dental Health Education menggunakan media busy book efektif dalam meningkatkantingkat pengetahuan kesehatan gigi dan mulut pada anak usia 3-6 tahun di PAUD Terpadu Negeri Pembina Banjarmasin Tengah 2.