Needle Stick Injury (NSI) merupakan bahaya kesehatan kerja yang umum terjadi pada perawat akibat seringnya terpapar alat medis tajam selama kegiatan perawatan pasien. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis hubungan antara pengetahuan, kelelahan kerja, dan motivasi kerja dengan kejadian NSI pada perawat di RSUD Idaman Banjarbaru. Studi observasional analitik dengan desain cross-sectional ini melibatkan 83 perawat yang dipilih menggunakan teknik purposive sampling. Data dikumpulkan menggunakan kuesioner terstruktur dan dianalisis menggunakan uji chi-square. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 19 responden (22,9%) mengalami NSI dalam satu tahun terakhir. Sebagian besar responden memiliki pengetahuan yang baik mengenai pencegahan NSI (60,2%), tingkat kelelahan kerja yang rendah (54,2%), dan motivasi kerja yang kurang baik (53,0%). Pengetahuan (p = 0,035; PR = 3,510) dan kelelahan kerja (p = 0,046; PR = 3,380) berhubungan secara signifikan dengan kejadian NSI, sedangkan motivasi kerja tidak berhubungan (p = 1,000). Kesimpulannya, peningkatan pengetahuan perawat dan pengelolaan kelelahan kerja merupakan strategi penting untuk mengurangi angka kejadian NSI serta meningkatkan kesehatan dan keselamatan kerja (K3) di rumah sakit.